h7n9禽流感病毒核酸检测方法,,如何治疗h7n9

一、感染H7N9禽流感病毒的临床表现有哪些

(一)一般表现

患者一般表现为流感样症状，如发热，咳嗽，少痰，可伴有头痛、肌肉酸痛和全身不适。重症患者病情发展迅速，表现为重症肺炎，体温大多持续在39℃以上，出现呼吸困难，可伴有咯血痰;可快速进展出现急性呼吸窘迫综合征、纵隔气肿、脓毒症、休克、意识障碍及急性肾损伤等。

(二)实验室检查

1.血常规。白细胞总数一般不高或降低。重症患者多有白细胞总数及淋巴细胞减少，并有血小板降低。

2.血生化检查。多有肌酸激酶、乳酸脱氢酶、天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶升高，C反应蛋白升高，肌红蛋白可升高。

3.病原学检测。

(1)核酸检测。对患者呼吸道标本(如鼻咽分泌物、口腔含漱液、气管吸出物或呼吸道上皮细胞)采用real time PCR(或RT-PCR)检测到H7N9禽流感病毒核酸。

(2)病毒分离。从患者呼吸道标本中分离H7N9禽流感病毒。

(三)胸部影像学检查

发生肺炎的患者肺内出现片状影像。重症患者病变进展迅速，呈双肺多发磨玻璃影及肺实变影像，可合并少量胸腔积液。发生ARDS时，病变分布广泛。

(四)预后

人感染H7N9禽流感重症患者预后差。影响预后的因素可能包括患者年龄、基础疾病、合并症等。

二、对H7N9型禽流感的鉴别诊断方法

(一)诊断

根据流行病学接触史、临床表现及实验室检查结果，可作出人感染H7N9禽流感的诊断。在流行病学史不详的情况下，根据临床表现、辅助检查和实验室检测结果，特别是从患者呼吸道分泌物标本中分离出H7N9禽流感病毒，或H7N9禽流感病毒核酸检测阳性，可以诊断。

1.流行病学史。发病前1周内与禽类及其分泌物、排泄物等有接触史。

2.诊断标准。

(1)疑似病例：符合上述临床症状及血常规、生化及胸部影像学特征，甲型流感病毒通用引物阳性并排除了季节性流感，可以有流行病学接触史。

(2)确诊病例：符合疑似病例诊断标准，并且呼吸道分泌物标本中分离出H7N9禽流感病毒或H7N9禽流感病毒核酸检测阳性。

重症病例：肺炎合并呼吸功能衰竭或其他器官功能衰竭者为重症病例。

(二)鉴别诊断

应注意与人感染高致病性H5N1禽流感、季节性流感(含甲型H1N1流感)、细菌性肺炎、传染性非典型肺炎(SARS)、新型冠状病毒肺炎、腺病毒肺炎、衣原体肺炎、支原体肺炎等疾病进行鉴别诊断。鉴别诊断主要依靠病原学检查。

三、对H7N9禽流感病毒核酸检测

(一)样本处理

样本的核酸提取应当在样本处理区进行。按所采用的商品化试剂盒说明书要求，取适量待检样本、阳性及阴性对照进行核酸提取。样本应尽可能新鲜，提取过程应严防RNA酶污染及操作不当导致的RNA降解。提取过程如涉及离心步骤，应采用低温冷冻离心机;在生物安全柜内进行加样、提取过程中，为防止RNA降解，可将试管架置于托盘内平铺的碎冰上。提取好的RNA应及时用于检测，否则应当-70℃保存。如无-70℃保存条件，可于-20℃冰箱暂存。

(二)试剂准备

试剂准备应当在试剂准备区进行。根据所用的试剂盒，样本可进行甲型流感病毒核酸、禽流感H7亚型或H7N9病毒核酸的检测。试剂的配制按所用商品化试剂盒说明书进行。除酶混合物外，其它试剂在使用前应当在室温充分复融，混匀并瞬时低速离心。反应液分装时尽量避免产生气泡，上机前注意检查各反应管是否盖紧，以免管内溶液泄露污染仪器。分装有扩增反应液的反应管应当扣盖或装入密实袋内再转移至样本处理区。

(三)加样

加样应当在样本处理区进行。加样时应当使样品完全落入反应液中，不应有样品粘附于管壁上，加样后应尽快盖紧管盖。

按试剂、仪器说明书完成加样和PCR反应管准备。

(四)PCR扩增检测

PCR扩增检测在扩增区进行。待检PCR管转移至扩增区，按顺序置于PCR仪上，编辑样本信息，按试剂和仪器说明书设定循环参数。

(五)结果分析

根据所用试剂盒说明书设置基线值(baseline)。荧光阈值(threshold)设定以阈值线刚好超过阴性对照品扩增曲线(无规则的噪音线)的最高点为原则，且Ct值应大于所设置的扩增循环数(或显示为undet)。使用仪器配套软件自动分析结果。

(六)质量控制

检测过程对可能出现的假阳性和假阴性进行质量控制，除了检测商品试剂盒所提供阳性和阴性对照外，每次临床样本检测时，至少应当有1份弱阳性和3份阴性质控样本(多份阴性质控样本设置对实验室“污染”所致假阳性的监控更为有效)，随机放在所检测标本的中间。弱阳性质控样本可为检测阳性的灭活稀释后保存的临床样本、灭活病毒或假病毒颗粒等，如所采用的商品化试剂盒有“内标”控制假阴性，或弱阳性质控样本来源困难，可暂不设弱阳性质控。阴性质控样本采用标本采集管内溶液即可。质控样本应与临床标本同等对待，参与样本核酸提取和扩增检测全过程。

试剂盒中的阳性和阴性对照用于判断实验室的有效性，按试剂盒说明书进行。

(七)实验结果的判定与解释

按照试剂盒说明书进行。对于出现弱阳性结果的样本应进行重复检测，并注意与可能的实验室轻度或样本交叉“污染”所致假阳性结果区别。

四、对H7N9型禽流感的治疗方案

(一)对临床诊断和确诊患者应进行隔离治疗。

(二)对症治疗。可吸氧、应用解热药、止咳祛痰药等。

(三)抗病毒治疗。应尽早应用抗流感病毒药物。

1.神经氨酸酶抑制剂：可选用奥司他韦(Oseltamivir)或扎那米韦(Zanamivir)，临床应用表明对禽流感病毒H5N1和H1N1感染等有效，推测对人感染H7N9禽流感病毒应有效。奥司他韦成人剂量75mg每日两次，重症者剂量可加倍 ，疗程5-7天。扎那米韦成人剂量10mg，每日两次吸入。

2.离子通道M2阻滞剂：目前实验室资料提示金刚烷胺(Amantadine)和金刚乙胺(Rimantadine)耐药，不建议单独使用。

(四)中医药治疗。

1.疫毒犯肺，肺失宣降

症状：发热，咳嗽，少痰，头痛，肌肉关节疼痛。

治法：清热宣肺

参考处方：

桑叶 金银花 连翘 炒杏仁 生石膏 知母 芦根 青蒿 黄芩 生甘草

水煎服，每日1—2剂，每4—6小时口服一次。

加减：咳嗽甚者加枇杷叶、浙贝母。

中成药：可选择疏风解毒胶囊、连花清瘟胶囊、清开灵注射液。

2.疫毒壅肺，内闭外脱

症状：高热，咳嗽，痰少难咯，憋气，喘促，咯血，四末不温，冷汗淋漓，躁扰不安，甚则神昏谵语。

治法：清肺解毒，扶正固脱

参考处方：

炙麻黄 炒杏仁 生石膏 知母 鱼腥草 黄芩炒栀子 虎杖 山萸肉 太子参

水煎服，每日1—2剂，每4—6小时口服或鼻饲一次。

加减：高热、神志恍惚、甚至神昏谵语者，上方送服安宫牛黄丸;肢冷、汗出淋漓者加人参、炮附子、煅龙骨、煅牡蛎;咯血者加赤芍、仙鹤草、侧柏叶;口唇紫绀者加三七、益母草、黄芪、当归尾。

中成药：可选择参麦注射液、生脉注射液。

(五)加强支持治疗和预防并发症

注意休息、多饮水、增加营养，给易于消化的饮食。密切观察，监测并预防并发症。抗菌药物应在明确继发细菌感染时或有充分证据提示继发细菌感染时使用。

(六)重症患者的治疗

重症患者应入院治疗，对出现呼吸功能障碍者给予吸氧及其他相应呼吸支持，发生其它并发症的患者应积极采取相应治疗。

关于H7N9型禽流感的常见问题的疫情答问

1．目前我国人感染H7N9禽流感疫情现况？
据各省市卫生部门统计，截至2013年5月29日10时，全国已确诊131人，37人死亡，76人痊愈，分布于北京(2例)、上海(33例，死亡13例)、江苏(27例、死亡8例)、浙江(46例、死亡7例)、安徽(4例，死亡2例)、山东(2例)、河南(4例)、江西(5例、死亡1例)、福建(5例)、湖南（2例）、台湾（1例）共11省市。
2．H7N9禽流感病毒是否能够在人与人之间传播？
目前尚未证实该病毒具有人传人的能力。
3．本次人感染H7N9禽流感的病例的感染来源？
此次人感染的H7N9流感病毒从病毒生物学上属于禽源流感病毒，既往国际上所发现的人感染H7亚型的流感病毒也多来自于禽类，但截至目前，确诊病例的具体感染来源尚不清楚。
4.病例的密切接触者感染发病情况？
目前确诊病例的所有密切接触者中，均没有发现类似病例。
5．目前有针对H7N9禽流感病毒的疫苗吗？
目前尚无针对H7N9禽流感病毒的疫苗，国家卫生和计生委正在组织对H7N9禽流感的疫苗研究。一般疫苗研发期需要6-8个月，但对于全新认识的禽流感病毒，可能需要更长的研发时间。
6.目前的治疗方法？
基因序列分析显示，该病毒对神经氨酸酶抑制剂类抗流感病毒药物敏感。根据其他型别流感抗病毒治疗的经验，发病后早期使用神经氨酸酶抑制剂类抗流感病毒药物可能是有效的，但对人类新发现的H7N9禽流感病毒感染的特异性治疗手段仍需观察研究。
如果出现感冒类症状，尤其是接触过禽鸟类的病人，要及时就医，争取做到早发现，早诊断，早治疗。轻度感冒病人通常局限在上呼吸道，一般可自愈；对于有肺炎症状的要及时去医疗机构就诊，及时住院干预；对于危重度的应进行重症监护。
7.公众感染H7N9禽流感病毒的风险大吗？
目前，仅在局部地区发现少数病例，病例的密切接触者经医学观察未发现续发病例。根据目前有限证据推测，公众感染该病毒的风险较低。
8.医务人员感染H7N9禽流感病毒的风险大吗？
目前尚无H7N9人传人的确切证据，3例确诊病例接诊的医务人员中均未发现感染病例，但由于医务人员比普通公众接触患有感染性疾病病人的机会更多，建议医务人员在诊治病人过程中采取必要的防护措施。在接诊疑似或确诊H7N9禽流感病例时，应采取有效的防护措施，即标准预防、飞沫传播预防和接触预防。
9.目前各地医疗机构对H7N9禽流感这一新发疾病的诊疗能力如何？
病例出现后，国家卫生计生委迅速组织专家制定了人感染H7N9禽流感的诊疗方案和医院感染预防控制指南，并于4月2日对全国省级和部分地市级医务人员开展了诊疗技术培训，规范指导临床一线做好病例发现、诊断和治疗。
10.目前我国对禽流感病毒的检测能力如何？
目前我国对禽流感病毒的检测能力有很大提高，检测试剂已经在31个省份派发到位。
11.目前我国有关部门已采取的行动？
病例出现后，当地卫生部门高度重视，及时采取了病人救治、流行病学调查、标本采集与送检、密切接触者医学观察，并加强了对不明原因肺炎病例的监测工作。
国家卫生和计划生育委员会对此次疫情高度重视，接到重症不明原因肺炎疫情报告后，立即派出专家工作组，指导当地开展患者的救治和调查工作，召开多部门会商会，对疫情性质进行分析研判，并安排部署了相关调查、防控和应对准备工作。国家卫生和计生委成立了防控领导小组，迅速组织专家，于4月3日出台了3个专业技术方案，即H7N9禽流感疫情防控方案、诊疗方案、医院感染预防与控制技术指南，印发了关于加强人感染H7N9禽流感疫情防控工作的通知，要求各地卫生行政部门高度重视，坚持依法科学防控，加强医疗救治工作和监测和实验室检测等防控工作，做好信息报送和发布工作。
国家疾控中心接到病例报告和送检标本后，及时开展了疫情风险研判和实验室检测研究，在短时间内做出了病例的病原学诊断，在全球首次发现和确认了新型的H7N9禽流感病毒导致的人类感染病例，并对新病毒的特征进行了深入的分析。

H7N9型禽流感的防控措施

卫生部发布《人感染H7N9禽流感疫情防控方案》
人感染H7N9禽流感疫情防控方案（第一版）
为做到早发现、早报告、早诊断、早隔离、早治疗人感染H7N9禽流感病例，控制疫情的传播、蔓延，保障人民群众身体健康和生命安全，特制定本方案。
一、目的
（一）早期发现人感染H7N9禽流感病例。
（二）规范病例发现、报告、流行病学调查、实验室检测、密切接触者管理等疫情处置工作。
（三）指导各地开展人感染H7N9禽流感疫情防控工作。
二、适用范围
此方案适用于现阶段人感染H7N9禽流感病例的防控。
目前对该疾病的感染来源、感染发病的危险因素、传播途径、潜伏期、传染期、临床特点以及该病毒人际传播能力尚不清楚。本方案将根据对该疾病科学认识的深入和疫情形势变化适时更新。
三、病例的发现、报告
（一）病例定义。
1.监测病例。同时具备以下4项条件的病例：
（1）发热(腋下体温≥38℃)；
（2）具有肺炎的影像学特征；
（3）发病早期白细胞总数降低或正常,或淋巴细胞分类计数减少；
（4）不能从临床或实验室角度诊断为常见病原所致肺炎。
2.人感染H7N9禽流感疑似病例与确诊病例定义参照《人感染H7N9禽流感诊疗方案（2013年第1版）》（卫发明电〔2013〕5号）。
（二）发现与报告。各级各类医疗机构发现符合监测定义的病例后，须于24小时内进行网络直报。报告疾病类别选择“其他传染病”，并在备注栏中注明“人感染H7N9禽流感监测病例”。尚不具备网络直报条件的医疗机构，应当于24小时内以最快的通讯方式（电话、传真等）向当地县级疾病预防控制机构报告，并寄出传染病报告卡，县级疾病预防控制机构在接到报告后立即进行网络直报。
各级各类医疗机构发现人感染H7N9禽流感疑似病例、确诊病例后，应当于2小时内进行网络直报。报告疾病类别选择“其他传染病”，并在备注栏中注明“人感染H7N9禽流感疑似病例或者确诊病例”。尚不具备网络直报条件的医疗机构，应当于2小时内以最快的通讯方式（电话、传真等）向当地县级疾病预防控制机构报告，并寄出传染病报告卡，县级疾病预防控制机构在接到报告后立即进行网络直报。
四、病例的流行病学调查、采样与检测
（一）流行病学调查。各县（市、区）疾病预防控制机构接到辖区内医疗机构或医务人员报告人感染H7N9禽流感疑似病例或确诊病例后，应当按照《人感染H7N9禽流感流行病学调查方案》（附件1）进行调查，重点了解病例的基本情况、临床表现、发病前7天内可疑动物（如禽类、猪等）和农贸市场的接触和暴露情况，以及发病后至隔离治疗期间接触人员情况等，必要时根据个案流行病学调查情况组织开展病例主动搜索。
（二）标本采集、保存、运送与实验室检测。医疗机构应当及时采集病例的相关临床样本。采集的临床标本包括病人的上呼吸道标本（包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液）、下呼吸道标本（如气管吸取物、肺洗液、肺组织标本）和血清标本等。应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本（尤其是下呼吸道标本）和发病7天内急性期血清以及间隔2-4周的恢复期血清。如病人死亡，应当尽可能说服家属同意尸检，及时进行尸体解剖，采集组织（如肺组织、气管、支气管组织）标本。
标本采集、保存、运送与实验室检测按照《人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实验室检测策略》（附件2）进行。
采集病例的临床标本后，县级疾病预防控制机构和病例收治的医疗机构要密切配合，按照生物安全的相关规定进行包装，并于24 小时内送当地国家流感网络实验室检测。各地流感监测网络实验室应开展核酸检测，具备相应生物安全条件的网络实验室可开展病毒分离，并将分离的病毒按要求及时送国家流感中心，未开展病毒分离的网络实验室需将核酸检测阳性的病例原始标本按要求及时送国家流感中心。
发生人感染H7N9禽流感疫情的省份，常规流感样病例监测哨点医院采集流感样病例标本数每周不低于15份，并将H7核酸检测纳入常规检测项目。
五、病例管理和感染防护
参照《人感染H7N9禽流感医院感染预防与控制技术指南（2013年版）》（卫发明电〔2013〕6号），落实消毒、院内感染控制和个人防护等措施。
六、密切接触者的追踪和管理
（一）定义。
（1）诊治疑似或确诊病例过程中未采取防护措施的医护人员或曾照料患者的家属；
（2）在疑似或确诊病例发病后至隔离治疗期间，有过共同生活或其他近距离接触情形的人员;
（3）经现场调查人员判断符合条件的其他人员。
（二）追踪和管理。
由县级卫生行政部门组织对密切接触者进行追踪和管理，对密切接触者实行医学观察/健康随访，不限制其活动，每日晨、晚各1次测体温并了解是否出现急性呼吸道感染症状。一旦出现发热（腋下体温≥37.5℃）及咳嗽等急性呼吸道感染症状，则立即转送至当地的定点医疗机构进行诊断、报告及治疗。
疾病预防控制机构负责标本采集和实验室检测工作。应当采集病例的所有密切接触者的双份血清标本（开始实施医学观察时和间隔2-4周后），当密切接触者出现急性呼吸道症状时还要采集咽拭子，送当地国家级流感网络实验室进行检测。
医学观察期限为自最后一次与病例发生无有效防护的接触后7天。
七、及时开展风险评估
各级卫生行政部门应当根据人感染H7N9禽流感的疫情形势、病原学研究进展及时组织专家开展风险评估，进行疫情形势研判，达到突发公共卫生事件标准时，应当按照相关预案及时启动相应应急响应机制，并按照相关规定及时终止响应。
八、做好健康教育工作
各地要积极开展舆情监测，针对公众和社会关注的热点问题以及对该疾病认识的进展，积极做好疫情防控知识宣传和风险沟通，指导公众建立正确的风险认识，促进公众形成正确的疾病预防行为。尤其要加强禽畜养殖场、散养户、屠宰场、批发及交易市场等的禽畜饲养、捕捉、屠宰、储藏、运输、交易和经营人员以及宠物禽畜养殖人员的健康教育和风险沟通工作。
九、加强医疗卫生机构专业人员培训与督导检查
对医疗卫生机构专业人员开展人感染H7N9禽流感病例的发现与报告、流行病学调查、标本采集、实验室检测、病例管理与感染防控、风险沟通等内容的培训，提高防控能力。
各级卫生行政部门负责组织对本辖区内的防控工作进行督导和检查，发现问题及时处理。

H7N9治的好吗？H7N9现在能治好吗？

最近H7N9禽流感再次出现在大家面前，已经在多个地方发现了H7N9的例子，网友都在质疑真假，当然很多人都害怕会出现在自己周围，H7N9是一种传染性疾病，最好是原来禽类，那H7N9治的好吗？H7N9现在能治好吗？
1、H7N9治的好吗
从2013年首次发现H7N9禽流感病毒至今，医院已经可以成熟应对，并有多人治愈的先例，因此H7N9禽流感并非绝症，是能治好的。
2、H7N9的症状
人感染H7N9流感发病初期表现与流感相似，表现为发热、咳嗽，可伴有头痛、肌肉酸痛和全身不适，也可以出现流涕、咽痛等。部分患者肺部病变较重或病情发展迅速时，会出现胸闷和呼吸困难等症状，严重者会迅速发展为严重缺氧状态和呼吸衰竭，甚至导致死亡。
3、怀疑患上了怎么办
如果出现发热、咳嗽、头痛、全身不适等呼吸道症状，怀疑自己患有H7N9，不要恐慌，应戴上口罩，尽快就诊，并切记要告诉医生发病前有无外出旅游或与禽类接触史，确诊是否患有H7N9禽流感，并在医生指导下正规治疗和用药。
对确诊H7N9禽流感的患者，建议在当地具备条件的医院治疗，如无条件，应及早转诊。
4、H7N9早治疗好
在发现有H7N9禽流感症状时，应尽早到医院就诊治疗，因为早期治疗H7N9禽流感的难度较后期要低，药物的效果也更好一些。如果疏忽治疗，待到症状严重时，不仅治疗难度加大，费用增多，危险性也会更高。
5、H7N9治疗报销吗
H7N9禽流感治疗费用可以通过医保报销一部分，不同省市的报销比例有地区性差异。
目前我国发现的H7N9禽流感患者多为重症，由于当前对H7N9禽流感的认识有限，缺乏治疗经验，治疗过程中的花费相比普通病患要高出许多，而相关法律未规定特定传染病免费制度。
6、哪些人容易感染
一是老年人、孕妇和小孩等抵抗力较差的人。二是有高血压、糖尿病、慢性心肺疾病等基础病的人。三是经常与活禽密切接触的人，包括从事养殖、分拣、运送、销售、宰杀和死禽处理工作的人员。
以上三类人群，平时应加强体育锻炼，增强自身免疫力；保证充足的睡眠，避免过度劳累；注意个人卫生，打喷嚏或咳嗽时应掩住口鼻，并及时洗净双手；保持室内清洁和空气流通。
7、如何预防H7N9
1、日常生活中，应尽量避免直接接触活禽类、鸟类或其粪便，尤其是病（死）禽；若曾接触，须尽快用肥皂及水洗手。儿童应避免直接接触家禽和野禽。如果发现病（死）禽、畜，不要自行处理，应报告有关部门。2、不要购买活禽自行宰杀，不接触、不食用病（死）禽、畜肉，不购买无检疫证明的鲜、活、冻禽畜及其产品。3、生禽、畜肉和鸡蛋等一定要烧熟煮透。4、注意饮食卫生，在食品加工、食用过程中，一定要做到生熟分开，避免交叉污染，处理生禽、畜肉的案板、刀具和容器等不能用于熟食；在加工处理生禽畜肉和蛋类后要彻底洗手。5、健康的生活方式对预防本病非常重要。平时应加强体育锻炼，多休息，避免过度劳累；不吸烟，勤洗手，注意个人卫生，打喷嚏或咳嗽时掩住口鼻。6、若有发热及呼吸道症状，应戴上口罩，尽快就诊，并切记要告诉医生发病前有无外出旅游或与禽类接触史。应在医生指导下正规治疗和用药。
8、传播方式有哪些
(1)通过消化道感染
人类如果食用了未完全煮熟、消毒的携带H7N9病毒的禽类，如鸭子、鸡、鹅、鸟等，就会通过消化道感染H7N9禽流感病毒。
(2)通过呼吸道感染
呼吸道感染主要是通过接触携带H7N9禽流感病毒禽类的飞沫及接触其呼吸道分泌物进行感染，这种情况，即便没有直接食用携带H7N9禽流感病毒的鸡、鸭、鹅，也会感染到H7N9禽流感病毒，在禽类交易区比较容易被感染。
(3)通过眼结膜感染
有的人即便没有吃可能携带H7N9禽流感病毒的鸡、鸭、鹅，也没有去过禽类交易区，近期也没有接触过活禽，但也感染上了H7N9，那就可能是由于接触了带有相当数量H7N9病毒的物品，如禽类的的粪便、羽毛、呼吸道分泌物、血液等，接触后没有做好身体部位清洁，身体部位接触眼睛，造成眼结膜感染H7N9病毒。
(4)通过破损皮肤感染
当裸露在外部的皮肤发生破损，然后接触到接待H7N9病毒的活体鸡、鸭、鹅，或者其粪便、羽毛、排泄物等，可能会通过破损皮肤感染H7N9禽流感病毒。