将标本经过三氯醋酸进行处理,然后提出细胞内的核酸后,用不同的ph值的固绿染液,分别对细胞进行染色处理,如此便可以将细胞内的酸性蛋白质显现和区分出来。这是我们常用的区分以及判断细胞内,酸性蛋白质和碱性蛋白质的基本方法,并且这样一种方法也有实验依据。
通常是通过转换细胞的方法来进行判断,主要步骤如下:首先需要以破坏脊髓的方法处死蟾蜍,将蟾蜍的腹部向上放入蜡盘中,然后剪开胸腔,打开心包部位。再小心的在心脏上剪出一个小口,取出心脏血,将其中一滴滴在载玻片的一端,然后推片。按照这样一种方法,再做第二个血涂片,在室温的条件下进行晾干处理。
将所做好的涂片放在70%乙醇中进行固定,五分钟时间即可,然后在室温条件下晾干。第三步就是放入5%的三氯醋酸中,需要保证温度为60℃,时间为30分钟,然后抽提出细胞内的核酸。第四步为清洗,需要多次进行清洗,清洗时间达三分钟以上,主要目的是冲洗痕迹的三氯醋酸。然后用滤纸吸干在玻片上的水分。第五步,将其中一张片上放入0.1%的碱性固绿中进行染色,染色时间为10到15分钟,另一张片上放入0.1%的酸性固绿,时间为5至10分钟。然后进行冲洗,盖上盖片镜检。
转化细胞的结果就是在经过碱性固绿染色片中,细胞质以及核仁不着色,然后大部分的细胞核都被染成绿色,这就是碱性蛋白质的所在处。然后在经过酸性顾虑染色片中,因为细胞质以及核仁中含有酸性蛋白质,所以最终会被染成绿色。这是一种操作比较简便的方法,同时实验所需成本也并不高。
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