dna提取时苯酚起的作用,dna提取的几种办法

说起脱氧核糖核酸可能有很多朋友不知道，但是说到DNA大家就比较熟悉了。也就是说，脱氧核糖核酸就是DNA。大家都知道，DNA具有储存生命基因的重要作用。但是，你知道dna提取时苯酚起什么作用吗?dna提取有几种办法呢?现在，就和小编一起来看看吧。

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dna提取时苯酚起什么作用吗?

1、很多人都知道蛋白和DNA组成了染色体。蛋白质不能溶于苯酚中，但是蛋白质可以溶于苯酚。所以可以采用一定办法用苯酚来提取DNA。

2、一般来说，苯酚在DNA提取中可以抑制DNase的降解作用，与此同时使蛋白质变性。用苯酚来提取DNA时，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶，蛋白与DNA 联结键已断。

DNA提取有几种办法?

1、酚抽的提法：一般是用蛋酶K和SDS来破碎细胞，然后消化蛋白。

2、玻璃棒缠绕法来提取DNA：将裂解物铺于乙醇上，接着用盐酸胍裂解细胞，然后用带钩玻璃棒在界面轻轻搅拌，使得DNA沉淀液绕于玻棒之上。

3、可以采用甲酰胺解聚法：破碎细胞之后，接着用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，接着通过透析来获得DNA。

4、异丙醇沉淀法：和酚抽的提法基本相似，区别在于仅用二倍容积异丙醇来替代乙醇，目的是去除小分子RNA。

5、加热法：这样能够快速获得DNA。一般加热96℃-100℃，然后进行离心后取上清，就可以提取dna。

相信大家在看了本文的介绍之后，对于dna提取的知识有了更多的了解，也明白了dna提取时苯酚起的作用。在这里，小编还给大家科普一下，一般用dna来鉴定亲子关系，人的口腔细胞、血液和唾液等适用于用亲子鉴定，十分靠谱。希望本文能够带给大家一定的帮助。

DNA实验室常用的DNA提取方法有哪些

提取DNA主要有SDS和CTAB法，其实提取效果的好坏主要看提取的对象是什么样的材料，在提取之前一定要好好分析材料的特性，然后在设计实验步骤。
一）CTAB法
CTAB是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白质、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇。
（二）SDS法
利用高浓度的SDS，在较高温度（55—65℃）条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的做法使蛋白质及多糖杂质沉淀（最常用的是加入5M的KAc于冰上保温，在低温条件下KAc与蛋白质及多糖结合成不溶物），离心除去沉淀后，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
以下是在提取热带水果DNA时设计的两种不同方法步骤，对比起来CTAB法好，在禾本科植物效果差不多！
1、 CTAB法
1） 在所需量的CTAB抽提液中加入2－巯基乙醇，使终浓度达2％（v/v）。将此溶液预热至65℃。
对于每克新鲜的叶组织大约需要4ml的2－ME/CTAB抽提液。
2） 用液氮（－196℃）或干冰（－78℃）冷却粉碎器/匀浆器，将0.5 g植物组织粉碎成细粉，然后将组织转移到2.0 ml离心管。
3） 加入800 ?l预热的2－Me/CTAB，混合使之充分湿润，于65℃温育20 min，不时颠倒混匀。
4） 待冷至室温后，加入800 ?l氯仿/异戊醇（24：1），颠倒混匀至溶液呈乳浊状----但不要振荡。25℃，10000 rpm离心10 min。
5） 上清（~700 ?l）转移至另一干净的离心管中，加入5 ?l RNaseA贮液，37℃温育30 min。
6） 加入700 ?l氯仿/异戊醇，颠倒混匀，25℃，10000 rpm离心10 min。
7） 上清（~600 ?l）转移至另一干净的1.5 ml离心管中，加入600 ?l异丙醇，颠倒混匀，室温或-20℃放置20 min。
8） 25℃，12000 rpm，离心10 min，收集沉淀。
9） 去上清，加1 ml70%乙醇洗涤沉淀两次。（25℃，12000 rpm，离心10 min）
10）凉干DNA，溶于50 ?l ddH2O，4℃保存备用。
2、 SDS法
① 将0.3 g植物材料于液氮速冻，然后在研钵中将其磨碎，将粉末转至2 ml离心管中。
② 加入1.2 ml预热至65℃的提取缓冲液（其中加入3 μl β—巯基乙醇，增加DNA的稳定性），置65℃水浴中放置30分钟，不时颠倒混匀。。
③ 加入0.45 ml 5M的醋酸钾，混匀，冰浴20分钟，在10000 rpm离心20 min。需要的话，Miracloth纱布过滤除去沉淀，上清液转入另一离心管中。
④ 加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），轻轻颠倒混匀，12000 rpm离心15 min。
⑤ 转移上清液到另一新离心管中，加5 μl RNaseA贮液，37℃温育30 min。
⑥ 加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），轻轻颠倒混匀，12000 rpm离心15 min。
⑦ 转移上清液到另一新离心管中，加入0.7V异丙醇，轻轻颠倒混匀，-20℃放置30分钟沉淀核酸。
⑧ 25℃，12000 rpm，离心10 min，收集沉淀。
⑨ 弃上清，70％乙醇洗两次。
⑩ 凉干DNA，溶于50 ?l ddH2O，4℃保存备用。

ctab法提取dna步骤及其药品作用?

《转的》
CTAB
(hexadecyltrimethylammonium
bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L
NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
注:CTAB溶液在低于15℃
时会形成沉淀析出，因此，在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。
一、CTAB提取缓冲液的经典配方:
Tris-HCl
(pH8.0)提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏;
EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性;
NaCl
提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液相中;
CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离;
β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除。
二、CTAB提取缓冲液的改进配方:
(1)
PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染;同时它也能和多糖结合，有效去除多糖;
(2)
蛋白质的去除:酚/氯仿抽提使用变性剂变性(SDS、异硫氰酸胍等)高盐洗涤蛋白酶处理核酸分离，纯化;
(3)多糖的去除:高盐法:用乙醇沉淀时，在待沉淀溶液中加入1/2体积的5M
NaCl，高盐可溶解多糖。用多糖水解酶将多糖降解。在提取缓冲液中加一定量的氯苯(1/2体积)，氯苯可以与多糖的羟基作用，从而去除多糖。用PEG8000代替乙醇沉淀DNA:在500
μL
DNA液中加入200μl
20%
PEG8000
(含1.2
M
NaCl)，冰浴20min.核酸分离，纯化;
(4)
多酚的去除:在抽提液中加入防止酚类氧化的试剂:β-巯基乙醇、抗坏血酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇等加入易与酚类结合的试剂:如PVP(聚乙烯吡咯酮),PEG(聚乙二醇)，它们与酚类有较强的亲和力，可防止酚类与DNA的结合;
(5)
盐离子的去除:70%的乙醇洗涤核酸吸附,沉淀和溶解使用合适的吸附材料吸附核酸，其它的杂质均被洗掉，达到纯化DNA的目的另一种方式加入1/10体积的NaAc(pH5.2,3M)，用预冷的乙醇或异丙醇沉淀RNA吸附或沉淀后应用70%的乙醇洗涤，以除去盐离子等若长期储存建议使用TE缓冲液溶解TE中的EDTA能螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNasepH值为8.0，可防止DNA发生酸解。
三、基因组DNA提取常见问题
DNA中含有蛋白、多糖、多酚类杂质。DNA在溶解前，有酒精残留，酒精抑制后续酶解反应，DNA中残留有金属离子，有RNA的存留。对策:重新纯化DNA，去除蛋白、多糖、多酚等杂质，重新沉淀DNA，让酒精充分挥发，增加70%乙醇洗涤的次数(2-3次)，加入RNase降解RNA。
(1)DNA样品不纯，抑制后续酶解和PCR反应。DNA提取常见问题:材料不新鲜或反复冻融、未很好抑制内源核酸酶的活性、提取过程操作过于剧烈，DNA被机械打断，外源核酸酶污染反复冻融。尽量取新鲜材料，低温保存材料避免反复冻融，液氮研磨或匀浆组织后，应在解冻前加入裂解缓冲液。在提取内源核酸酶含量丰富的材料的DNA时，可增加裂解液中螯合剂的含量，细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔。所有试剂用无菌水配制，耗材经高温灭菌。将DNA分装保存于缓冲液中,避免反复冻融。
(2)DNA降解，DNA提取常见问题。实验材料不佳或量少，破壁或裂解不充分，吸附或沉淀不完全，洗涤时DNA丢失。尽量选用新鲜(幼嫩)的材料，动植物要匀浆研磨充分;G+菌，酵母裂解前先用生物酶或机械方式破壁。高温裂解时，时间适当延长(对于动物细胞,细菌可增加PK的用量)。增加吸附的时间、或低温沉淀小心操作。

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