DTT作用是什么

DTT作用是什么

DTT作用如下：

1、作为巯基化DNA的还原剂和保护剂。在DNA溶液中加入DTT，可以降低DNA的二聚化。

2、用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。

DTT，中文名为二硫苏糖醇。分子量为154、25，纯度大于百分之99。常用还原剂，有抗氧化作用，进口分装。DTT和巯基乙醇相比，作用相似，但DTT的刺激性气味要小，毒性也比巯基乙醇低。而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时，两者效果相近。

巯基乙醇保护rna的浓度

巯基乙醇提取rna作用 Tris饱和酚一般PH大于7.8，用于DNA的提取。其中，酚是强的蛋白变性剂，可以使细胞或组织中的蛋白质变性析出。 而Tris的主要作用是防治止酚类氧化，若酚类氧化，则会形成醌（两个苯环），醌含有强自由基，会破坏核酸结构。 同时，由于PH值大于7，在碱性环境中DNA处于水相，RNA处于有机相。从而分离上清，即可得到DNA。 Tris饱和酚的配置： 1、冰箱取出重蒸酚，室温放置－－－68度水浴溶化，切勿立即放入68度的水浴中，以防玻璃炸裂 2、加8－羟基喹啉至0.1％和β－巯基乙醇至0.2％，（原液14. 4MOL/ML），混匀，溶液呈现黄色，倒入分液漏斗中（也可在烧杯中进行） 3、加入等溶剂的1MOL/ML的Tris(PH8.0),反复混匀后，静至分层；放出下层黄色酚液，弃上层 4、加固体Tris约1g/100ml酚，摇匀，去水相 5、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)平衡数次，至PH为8.0 6、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)于棕色瓶中4度保存 7、如黄色消失或呈粉红色（说明酚已经被氧化），则不能使用 巯基乙醇提取rna作用机理 RNasin是一类从大鼠肝或人胎盘中提取出来的酸性糖蛋白质，鼠肝RNasin分子量为40KD；来源于人胎盘的RNasin分子量为51KD，等电点为4.7，最适pH为7～8。RNasin能与RNase非共价结合（Ki=3×1010）从而抑制了它们的活力，RNasin是RNA酶的一种非竞争性抑制剂。1mmol/L的二巯基乙醇对于RNasin的发挥抑制RNase的最大活性非常重要。 RNasin最好不要与某些蛋白质变性剂（如7mol/L的尿素）同时使用，因为尿素能使RNase-RNasin复合物分离，并释放出活性的RNase。 rna提取中乙醇的作用 1. 按照Invitrogen公司的Tizro说明书，在提取RNA过程中进行到加入75%乙醇后，可使RNA沉淀在4度保存一个月，在-20度保存一年。 2. 一般这种方法用的比较少，因为每次提RNA都是一气下来，中间没有停顿的，除非一次提很多，上午时间不够用，可进行到加入乙醇未知，然后放到-20度冰箱，下午可继续进行。 3. 一般保存方法都是RNA溶解到无RNase的水中，然后-80度冰箱保存。 4. 反复冻融对RNA的长时间保存肯定是有影响的，可分成小量保存，尽量减少冻融。 5. 现在有些试剂公司有相关的产品，可用于保存RNA，不过可能会有植物或动物，细胞或组织之分。 二巯基丙醇怎么提取 二巯基丙醇古代叫砒霜解药，二巯丙醇为无色或几乎无色、易流动的澄明液体。有类似葱蒜的气味。在甲醇、乙醇或苯甲酸苄酯中极易溶解，溶于水，在脂肪油中不溶，可防止砷、汞、铋、金、锑等金属对身体组织的中毒作用。名称介绍 中文名称：2,3-二巯基丙醇；2,3-二氢硫基-1-丙醇；2,3-二巯基-1-丙醇；二巯基丙醇；3-羟基-1,2-丙二硫醇；巴尔；巴尔双硫代甘油；英国抗路易斯气剂 dna提取中巯基还原剂 DTT作用如下： 1、DTT的作用之一是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。巯基化DNA末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体，特别是在存在氧气的情况下。 这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验（如DNA在生物感应器中的固定）的效率；而在DNA溶液中加入DTT，反应一段时间后除去，就可以降低DNA的二聚化。 2、DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。 但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部（溶剂不可及）的二硫键，这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性（高温加热或加入变性剂，如6M盐酸胍、8M尿素或1%SDS）。 反之，根据DTT存在情况下，二硫键还原速度的不同，可以判断其包埋程度的深浅。 DTT即DL-Dithiothreitol，中文名为二硫苏糖醇。分子式为C4H10O2S2，分子量为154.25，纯度>99%。常用还原剂，有抗氧化作用，进口分装。DTT和巯基乙醇相比，作用相似，但DTT的性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。 而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时，两者效果相近，但DTT价格略高一些。 RNA提取中巯基乙醇如何除去 是 TRIzol有毒性，trizol中含有苯酚，苯酚是刺激性气味。对呼吸道有伤害，闻久了会有晕的感觉。 1、TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。 2、苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。 巯基乙醇作用Rna提取 Trizol就是酚氯仿提取法的常用试剂 Trizol中有酚，异硫氰酸胍和B-巯基乙醇。他们的作用都是使蛋白变性，使蛋白质与核酸解聚。加入氯仿，用来分相，实际上是加速有机相和水相的分层，当溶液pH在酸性的时候，DNA分子就会沉淀在酚与溶液的界面，就是白色层，只有RNA分子留在水相，但溶液pH不在酸性范围内，会使DNA溶解在水相，所以使用时按照说明书要求根据细胞数或培养器皿底面积适量加入Trizol。最后异丙醇沉淀，将水相中RNA提取出来。 提rna加巯基乙醇 材料、试剂及器具 1、 材料 总rna提取物。 2、 试剂 (1)0.1%DEPC水：200ml双蒸去离子水加0.2mlDEPC焦炭酸、二乙酯混匀，室温放置过夜，高压灭菌。 (2)10x电泳缓冲液。 吗啉代丙烷磺酸(MOPS) 0.4mol/L(pH 7.0) NaAc 0.1mol/L 乙二胺四乙酸(EDTA) 10mmol/L (3)50mL变性琼脂糖凝胶(1%) (4)10x电泳缓冲液 5 mL 琼脂糖 0.5 g 0.1%DEPC水 36.5 mL 加热溶解，稍冷却，加入8.5 mL 37%甲醛。 (5)上样缓冲液：50%，1mmmol/LEDTA，0.4% 溴酚兰，0.4%二甲苯蓝。 (6)甲酰胺(去离子)。

2019-01-11

二硫键，又称S−S键，是2个巯基被氧化而形成的−S−S−形式的硫原子间的共价键，在蛋白质分子的立体结构形成上起着一定的重要作用。为了确定蛋白质的一级结构，首先必须将二硫键打开，使之成为线状多肽链。DTT和TCEP是常用的还原二硫键的试剂，那二者在使用中有什么不同呢？

 DTT中文名称为二硫代苏糖醇，是苏糖醇的C-1及C-4位羟基置换成巯基的化合物，常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。

 DTT有两个巯基基团，其作用能维持3~7天，挥发性不强，使用时可以直接加入到悬滴中去，或通过微透析的方法加入。但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部（溶剂不可及）的二硫键，这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性（高温加热或加入变性剂，如盐酸胍、尿素或SDS）。反之，根据DTT存在情况下，二硫键还原速度的不同，可以判断其包埋程度的深浅。另外，DTT可以使Ni被还原，因此在用Ni柱纯化带有His标签的蛋白时要避免使用DTT，而应该考虑TECP。

二硫键的断裂通常需要有大量的自由巯基和二硫键交换，三价膦系衍生物由于其较强的还原能力和对二硫键的选择还原性得到很多研究者的青睐。这类还原剂的还原是一个定量反应的过程，其原理是其中心原子“P”所带的孤电子对能与氧原子形成配位共价结合而具有还原性。如下式所示:

 TCEP，三(2-羰基乙基)磷盐酸盐，是三价磷系衍生物中作用最优的。它是一种无色、无味、易溶于水的弱还原性物质，在水中溶解度能达到310mg/mL。其在空气和水溶液中具有较高的稳定性，受温度和浓度的影响小。TCEP是一种极为合适的部分还原试剂，对还原二硫键选择性极强，除半胱氨酸外，几乎没有与其它氨基酸的副反应，并且能在更宽的pH值范围包括酸性条件(pH值3)下使用，从而有效减少酰胺键的水解。TCEP的反应活性温和、易溶、毒性小，且更容易操作，在酸性、碱性溶液中的稳定性都很好。而且还原能力比DTT强，它的作用可以维持2~3周，是公认的DTT(二硫代苏糖醇)的一种良好替代物。

 DTT(二硫代苏糖醇)和TCEP（三(2-羰基乙基)磷盐酸盐）可以相互代替，只是效果不同而已。与DTT相比，TECP还原能力更强，更具有选择性；无论在酸性还是碱性条件下都更加稳定；本身不带有电荷，不影响后续的实验。TCEP不仅是一种高效的二硫键还原剂，而且在某些巯基的交联反应中不需要除掉，因而在蛋白质化学及蛋白质组学研究常常优先选择TCEP。

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