电泳是指带电粒子在电场作用下,向着与其电荷相反的电极移动的现象。
常见的电泳分离常需要以凝胶为载体,不同的凝胶电泳需要不同的缓冲液和相应凝胶,缓冲液起到提供离子导电的作用;凝胶可以支撑分离样品。带点样品在电场的作用下在凝胶中移动,凝胶中的空隙会对大、小分子产生不同的阻力,使其移动速率不同,从而使目的带与杂带分离。不同浓度的凝胶会形成不同大小的空隙,所以大分子样品应该用浓度低的凝胶。
琼脂糖凝胶电泳的原理:
琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大提高了分辨能力。
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场中向阳极移动。在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应,即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。
做琼脂糖凝胶电泳的注意事项:
1、Marker的选择
Marker的选择要适中,Marker应该选择在目标片段大小附近ladder较密的,这样对目标片段大小的估计才比较准确。如果marker太大就可能跑不开,挤到一起,起不到marker的作用。
2、煮胶要完全,胶要摇匀
注意煮胶完全,不然有小颗粒会影响跑胶结果。如果胶没有摇匀,跑胶的时候,相同的DNA的速度就不会相同,这样会出现弥散条带。
以上内容参考:——琼脂糖凝胶
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