这个提质粒DNA的原理是什么

这个提质粒DNA的原理是什么

原理：将细菌悬浮于含有和能消化细胞壁的溶菌酶的缓冲液中，然后加热到使其裂解。加热除了破坏细菌外壁，还有助于解开DNA链的碱基配对，并使蛋白质和染色体DNA变性。

特征：蛋白质的去除，主要是靠不溶解的蛋白质复合物的形成。虽然将中和后的体系置于一段时间，可以形成更多的该不溶复合物，从而使蛋白质残留更少，但实践证明这样做并不是必须的除非是大量抽提。

为什么能在细菌破碎后的细菌提取液中分离到质粒DNA

首先要知道，质粒是 共价，闭合，环状的DNA（cccDNA）。以常用的碱裂解法为例：
当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，当加入中和液后，质粒的cccDNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，而其他形式存在的DNA则会依然以絮状形式存在；离心时质粒DNA留在上清中；蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。

质粒DNA提取和细胞基因组DNA提取的异同

不同点

一、提取方法不同

DNA提取主要是CTAB方法，其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法。生物方式：酶法。

质粒抽提方法即去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。

二、提取原理不同

质粒DNA提取用到三种溶液以及硅酸纤维膜（超滤柱）。 溶液Ⅰ：50 mM葡萄糖 / 25 mMTris-HCl/ 10 mMEDTA，pH 8.0；溶液Ⅱ：0.2 N NaOH / 1%SDS； 溶液Ⅲ：3 M 醋酸钾/ 2 M 醋酸/75%酒精。

细胞基因组DNA提取

保证核酸一级结构的完整性；核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。

三、提取复杂程度不同

质粒DNA提取一般用沸水浴法和碱裂解法，它主要是将细胞内的环状质粒提取出来，一般需要用SDS裂解，RNA酶降解，然后过柱，再进行洗脱.过程比较简单。

而基因组DNA提取则较为复杂，也需要用SDS裂解和RND酶降解，但降解时间较长，同时对有些革兰氏阳性细菌还要进行溶菌酶处理，最后用氯仿-苯酚进行除蛋白，这一步重复进行多次，在用氯仿除去多余的苯酚，用乙醇清洗烘干后溶于TE缓冲液中。整个过程比提质粒更复杂，耗时也更长。

相同点

都是去除 RNA、除蛋白质及其它杂质。

-质粒提取

-dna提取

基因组dna提取的原理

1.溶液I—溶菌液：
溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA：
(1)螯合Mg2+、Ca2+等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用(DNase作用时需要一定的金属离子作辅基);
(2)EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
2.溶液II-NaOH-SDS液：NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。但当pH>12或pH<3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。 在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1/L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6， 因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS：
SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有：
(1)溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
(2)解聚细胞中的核蛋白。
(3)SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R+-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。 但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中 (用RNase去除RNA时)受到干扰。
3. 溶液III--3mol/L NaAc(pH4.8)溶液：
NaAc的水溶液呈碱性，为了调节pH至4.8，必须加入大量的冰醋酸。 所以该溶液实际上是NaAc-HAc的缓冲液。用pH4.8的NaAc溶液是为了把pH12.6的抽提液，调回pH至中性， 使变性的质粒DNA能够复性，并能稳定存在。而高盐的3mol/L NaAc有利于变性的大分子染色体DNA、 RNA以及SDS-蛋白复合物凝聚而沉淀之。前者是因为中和核酸上的电荷，减少相斥力而互相聚合.

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