提纯结核菌素

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解析:

结核病是由结核杆菌引起的人、畜共患的一种慢性传染病。其特点是组织器官形成肉芽肿，消瘦、体重减轻和死亡。

(一)病原

结核杆菌分人型、牛型和禽型。以牛型对牛的致病性最强。牛型结核杆菌是1种细长杆菌，单个或呈链排列，为抗酸染色的革兰氏阳性菌，不形成芽孢，不运动。病牛渗出物和粪便的结核杆菌能存活多日，厩舍消毒可用2%—3％氢氧化钠喷洒。

(二)流行

病畜是传染源。结核菌可随呼出的气体、痰、粪便、尿、分泌物或奶排出体外，当易感染牛与病牛接触时，或食入被污染的饲料、饮水等后可引起感染。

饲养管理不良，如厩舍阴暗、通风不良，牛群拥挤，密度过

大，饲料营养缺乏和环境卫生差等，都可加快本病的传播。

(三)症状

牛感染结核病经过缓慢，由于患病器官不同，临床症状各不一致。

1．肺结核 初期咳嗽短粗干咳，继之咳嗽频繁，呈湿咳带痛，鼻漏呈粘性或脓性，呼吸次数增加，听诊有干性或湿性罗音，叩诊胸部呈浊音或半浊音区。病牛呈渐进性消瘦、贫血、乳量减少。

2． *** 结核 乳上淋巴结肿大，无热无痛，后乳区可发生无痛性硬固肿大，乳量减少，乳汁稀薄，有的病牛 *** 发生萎缩。

3．生殖道结核 从 *** 内排出白色或黄色混浊粘性、脓性液体，内含絮状物，子宫角增大，母牛 *** 频繁， *** 增强，屡配不孕或孕牛发生流产。

4．肠结核 肠系膜淋巴结肿胀，疝痛，病畜食欲不振，病初腹泻或与便秘交替，后呈持续性腹泻，粪呈稀粥状，混有粘液或脓液。

(四)诊断

牛结核菌素皮内试验是目前奶牛场所采用的主要诊断方法。已成为常规检疫制度，每年春、秋各检疫一次。有老的牛型菌素(OT)和提纯牛型菌素(PPD)试验两种。

1．结核菌素(OT)试验

(1)注射部位：成年牛在左侧颈中部上1/3处；3月龄以内犊牛在肩胛前部剪毛，面积约5cm×5cm，在剪毛部中央，拇指与食指轻轻捏起皮肤，用卡尺量其皮肤皱褶厚度并记录。

(2)注射剂量：在剪毛处中央用酒精消毒，皮内注射结核菌素原液：3月龄内犊牛0．1ml，3—12月龄牛0．15ml，成年牛0．2ml。

(3)观察反应：于注射后第72h及120h两次观察反应。检查注射局部温度、疼痛反应及肿胀性质．用卡尺测量注射部皮肤皱褶厚度及肿胀面积，并做好记录；在72h观察同时，须在第1次注射的同一部位，以同一剂量进行第2次注射；第2次注射后 48h(即第1次注射后120h)再观察一次并测量其皮厚。

(4)判定标准：

阳性反应(+)：皮肤皱褶比原皮厚增加8mm以上者：或局部发热、有痛感、并呈现界限不明显的弥漫性肿胀，硬软度似如面团，其肿胀面积在35mm×45mm以上。

可疑反应(±)：炎性肿胀面积在35mm×45mm以下，皮肤皱褶厚度增加5--8mm。

阴性反应(—)：无炎性肿胀，皮肤皱褶厚度不超过5mm，或仅有坚实、冷硬、界限明显的硬结者。

2．提纯牛型菌类(PPD)试验 在牛颈部一侧中部剪毛，量皮厚后，皮内注射菌素O．1ml，72h观察结果。当注射部位红肿，皮厚增加4mm以上，为阳性；皮厚增加2—3．9mm，红肿不明显，为可疑；皮厚增加在2mm以下者，为阴性。可疑牛须经2个月后在同一部位，用同样方法复检；两次可疑者可判为阳性。

为了准确，试验时，可在颈部的另一侧同时注射禽结核菌素做对比，若对禽型结核菌素的反应大于牛型菌素，则认为被检牛不是牛结核。

(五)预防

加强防疫、定期检疫是防治的有效措施。牛场应于每年春、秋进行两次结核检疫，开放性病牛屠宰，无症状阳性牛应隔离饲养或淘汰。病畜污染的牛棚、用具用20%漂白粉、5％来苏儿消毒。可疑牛于检疫后的2个月复检，凡两次可疑者可判为阳性；引进牛须进行结核检疫，确为阴性者再入场；患结核的饲养员，及时从场内挑出。无症状的结核阳性牛可在一偏僻场地集中饲养，此为结核牛场，该场母牛所产犊牛立即与母牛分开，喂3—5天初乳后，调入中转站内饲喂，到20一30日龄做第1次结核检疫；于100—120日龄做第2次检疫；于160—180日龄进行第3次检疫。如果3次检疫全为阴性者可调入健康群。

结核菌素是用来帮助诊断有无结核菌感染的生物制品，它是由结核菌培养滤液制成，有效成分为结核菌所含的结核蛋白。下面介绍4 种结核菌素。

（1）旧结核菌素：最初由郭霍氏用甘油肉汤培养基所制成，因为方法古老，沿用年代已久，为了与后来的结核菌素区别，所以，叫它为旧结核菌素，用（OT）表示。

（2）纯蛋白衍生物（PPD）：用苏通氏培养基培养结核菌，经过灭菌超过滤后，用三氯乙酸将蛋白质沉淀下来，再用乙醚除去三氯乙酸，然后提纯结核蛋白。国内已制成冻干制品供应，性质稳定，57反映清晰，阳性率较旧结核菌素（OT）略高，可代替旧结核菌素（OT）。

（3）死卡介苗代替结核菌素：将每毫升50mg 的卡介苗，置于60℃水浴1 小时而制成。它引起的结核菌素反应一般较轻。

（4）卡介苗或其他分枝菌素的纯蛋白衍生物：利用卡介菌苗或其他分枝杆菌的培养滤液制成。现临床很少用它来诊断结核。

1生物学性状
　　菌体为细长略弯的杆菌，经抗酸染色染成红色。本菌营养要求高，专性需氧，最适pH以6.5～6.8为宜。生长缓慢，在固体培养基经2周～4周才出现肉眼可见的菌落。对干燥的抵抗力特别强，对酸碱有较强的抵抗力，易产生耐药性变异及L型细菌。
2 致病性
　　致病物质
　　·脂质 ①索状因子 能使结核分枝杆菌相互粘连，在液体培养基中呈索状排列。能破坏细胞线粒体膜，影响细胞呼吸。抑制白细胞游走和引起慢性肉芽肿。②磷脂 能促结核结节的形成。③蜡质D 可激发机体产生Ⅳ型超敏反应。④硫酸脑苷脂 使结核分枝杆菌能在吞噬细胞中长期存活。
　　·蛋白质 主要成分是结核菌素，和蜡质D结合后能使机体发生超敏反应。
　　所致疾病
　　结核分枝杆菌可通过呼吸道、消化道或损伤的皮肤侵入易感机体，引起多种组织器官的感染，其中以肺部感染最常见。
　　·原发感染 多发生于儿童，为初次感染。机体因缺乏特异性免疫，结核分枝杆菌易由原发病灶扩散。
　　·继发感染 多发生于成年人，为再次感染。病菌可以是外来的或原来潜伏在原发病灶内的。由于机体已有特异性细胞免疫，故继发感染的特点是病灶多局限，一般不累及邻近的淋巴结。
3生化特征、免疫性与超敏反应
　　免疫性 主要是以T细胞为主的细胞免疫。
　　结核的免疫属于感染免疫，又称有菌免疫，即只有当结核分枝杆菌在体内存在时才有免疫力。一旦体内的结核分枝杆菌全部消失，免疫也随之消失。
　　免疫与超敏反应
　　结核分枝杆菌所致免疫应答的特点，是机体对结核分枝杆菌产生特异性免疫的同时，也产生了迟发型超敏反应。
　　结核菌素试验
　　·结核菌素试剂 旧结核菌素(OT)和纯蛋白衍生物（PPD）。
　　·试验方法与意义
　　试验方法 常规试验取PPD5个单位注入受试者前臂屈侧皮内，48h～72h观察结果，
　　结果判断 如局部出现红肿硬结超过5mm者为阳性。表明曾感染过结核分枝杆菌，但不一定发病。接种过卡介苗者也可呈阳性。结核菌素试验强阳性（红肿硬结超过15mm）者可能有活动性结核，应进一步作其它检查。
　　局部出现红肿硬结小于5mm者为阴性。阴性反应表明未感染过结核杆菌，但应考虑以下情况：感染初期；老年人反应低下；严重结核病患者或正患有其它传染病如麻疹等；继发性细胞免疫功能低下，如艾滋病或肿瘤等用过免疫抑制剂者。
　　结核菌素试验主要用于①用于选择卡介苗接种对象及免疫效果的测定，若结核菌素试验阴性则应接种卡介苗，接种后若结核菌素试验已转阳，表明已产生免疫力；②作为婴幼儿结核病诊断的参考；③在未接种卡介苗的人群中作结核分枝杆菌感染的流行病学调查；④用于测定肿瘤患者等细胞免疫功能状况。