服药敏试验开展药品敏感性的测量,便于精确合理的运用药品开展医治。现阶段,临床医学微生物菌种试验室开展药敏试验的方式 关键有纸条外扩散法,稀释液法(包含琼脂和骨头汤稀释液法),抗生素浓度梯度法(E-test法),和自动化技术仪器设备等。
介绍
身体之外抗菌药敏感度实验通称药敏试验(AST),就是指在身体之外测量药品抗菌或除菌工作能力的实验。
依据英国我国临床医学试验室规范化联合会(NCCLS)最近强烈推荐的标准,对非苛氧菌(肠杆菌科病菌、铜绿假单胞菌、和别的非肠科链球菌、葡萄球菌属病菌、肠球菌属病菌)和苛氧菌(嗜血杆菌属病菌、淋病奈瑟菌、肺炎球菌和别的链球菌感染)挑选基本药敏试验的优选药品(A组抗生素)或临床医学应用的关键抗生素(B组抗生素)开展药敏试验。
抗菌药物对细菌感染传染性疾病的控制具有了十分关键的功效,但因为饲养全过程中不合理的、盲目跟风的乱用抗菌药物,许多高致病病菌造成了抗药性,促使抗菌药物对细菌性疾病的控制实际效果愈来愈差,不仅导致药品消耗,并且还耽误病况,给养殖场导致了非常大的财产损失。
伴随着新式病原菌的持续出現,抗菌药物的防效愈来愈差。而且各种各样病原菌对不一样的抗菌药的敏感度不一样,同一病菌的不一样菌种对不一样抗菌药的敏感度也是有差别。一直以来,各种各样病原菌抗药性的造成使各种各样常见抗菌药通常丧失药力,及其不可以非常好的把握药品对病菌的敏感性,因此 一个恰当的結果,可供临床医师采用抗菌药的参照,并提升功效。财政部动物检疫所青岛易邦生物技术有限企业小动物病疫诊治管理中心小结出几身合适农村基层开展药敏试验的操作步骤,现简易详细介绍以下。
归类
纸条外扩散法
该法是将带有定量分析抗菌药的过滤纸片贴在已打疫苗了检测菌的琼脂表层上,纸条中的药品在琼脂中外扩散,伴随着扩散距离的提升,抗菌药的浓度值呈多数降低,进而在纸条的周边产生浓度梯度。另外,纸条周边抗菌浓度值范畴内的菌种不可以生长发育,而抗菌范畴外的菌种则能够 生长发育,进而在纸条的周边产生全透明的抑菌圈,不一样的抗菌药品的抑菌圈直徑因受药品在琼脂中外扩散速率的影响而可能不一样,抑菌圈的尺寸能够 体现检测菌对药品的比较敏感水平,并与该药品对检测菌的MIC呈成反比。
稀释液法
稀释液法药敏试验可用以定量分析检测抗菌药对某一病菌的身体之外特异性,分成琼脂稀释液法和骨头汤稀释液法。试验时,抗菌药的浓度值一般历经倍比(lg2)稀释液,能抑止待测菌人眼由此可见生长发育的最少药品浓度值变成最少抗菌浓度值(MIC),一个特殊抗菌药的检测浓度值范畴应当包括可以检验病菌的解释性折点(比较敏感、中介公司和抗药性)的浓度值,另外也应当包括质量控制参照菌种的MIC.
2.1琼脂稀释液法最先制取含抗菌药的琼脂稀释液平板电脑。再打疫苗被测菌种,随后是結果判断
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阿奇霉素是氮杂类化合物,属大环内酯类抗生素,是用化学方法在红霉素A内酯环上插入一氮原子而衍生得到的。微生物学 :阿奇霉素的抗菌作用机制是与敏感细菌50S核糖体亚单位结合,影响细菌的蛋白质合成。其核酸合成不受影响。体外培养显示阿奇霉素在吞噬细胞和纤维母细胞中浓集。采用体外培养,1小时后测定细胞内、外药物浓度之比大于30。体内研究提示吞噬细胞内的高浓度药物可能有助于药物分布到炎症组织。阿奇霉素对下列细菌中的多数菌株具有抗菌活性,包括体外作用和临床疗效,参见本品包装说明书中的【适应症】部分 :需氧革兰阳性菌金黄色葡萄球菌肺炎链球菌注 :阿奇霉素对红霉素耐药的革兰阳性菌有交叉耐药。多数粪肠球菌和甲氧西林耐药葡萄球菌对阿奇霉素耐药。需氧革兰阴性菌 流感嗜血杆菌卡他莫拉菌淋病奈瑟氏球菌其他微生物肺炎衣原体沙眼衣原体嗜肺军团菌人型支原体肺炎支原体细菌产生的β内酰胺酶对阿奇霉素活性无影响。阿奇霉素对下列大多数菌株具有抗菌活性,包括体外作用和临床疗效 ,参见希舒美(阿奇霉素片剂)和希舒美(阿奇霉素干混悬剂)包装说明书中【适应症】部分。需氧革兰阳性菌金黄色葡萄球菌无乳链球菌肺炎链球菌化脓性链球菌需氧革兰阴性菌 杜克雷嗜血杆菌流感嗜血杆菌卡他莫拉菌淋病奈瑟氏球菌其他微生物 肺炎衣原体 沙眼衣原体肺炎支原体 下面是体外试验资料,[u]但其临床意义不明[/u] 。阿奇霉素对多数链球菌菌株(≥90%)的体外最低抑菌浓度(MIC)≤0.5 ug/mL ;对下列其他细菌中多数菌株(≥90%)的MIC≤2.0 ug/mL。但尚无完善的临床对照试验资料证实阿奇霉素治疗这些病原菌所致感染的安全性和疗效 。需氧革兰阳性菌链球菌 (C组、 F组和 G组)草绿色链球菌组需氧革兰阴性菌 百日咳博德特氏菌厌氧菌消化链球菌双路普雷沃氏菌其他微生物 解脲脲原体药敏试验方法如有可能,应向医生提供医院病房所用的抗菌药物的体外药敏试验结果,作为描述院内和社区获得性病原体敏感性情况的定期报告。这些报告可能不同于从门诊获得的敏感性数据,但有助于医生选择最有效的抗菌药物。[u]稀释技术[/u]:用定量方法测定抗菌药的最低抑菌浓度 (MIC)。MIC可以估计细菌对抗菌药的敏感性,测定MIC必须用标准化的方法,标准化方法的基础是稀释法(肉汤稀释法或琼脂稀释法)或等同的方法,要求采用标准的菌液浓度和标准的阿奇霉素的浓度。按下列标准判断MIC值的意义:淋病奈瑟球菌尚无确定的药敏标准,淋病奈瑟球菌的药敏试验不是常规。标准化的药敏试验方法要求用实验室质控菌株,确保实验操作技术的一致性,使用阿奇霉素标准粉剂,各质控菌株的药敏结果应为:扩散法测量抑菌圈直径也可以估计细菌对抗菌药的敏感性,试验结果重复性好。标准化的试验方法要求接种的菌量标准化。该方法用含15μg阿奇霉素的纸片检测细菌对阿奇霉素的敏感性,其纸片药敏试验的实验室报告应按表1标准解释:表 1. 对阿奇霉素的敏感性结果的解释标准 [sup]a[/sup]目前由于缺乏耐药菌株的资料,除了“敏感”类外尚无划定其他类别的标准。如果MIC 值超出“敏感”范围,则应把菌株送往参考实验室作进一步检测。[sup]b[/sup]链球菌包括肺炎链球菌对阿奇霉素和其他大环内酯类的敏感性可通过测试红霉素预测。淋病奈瑟球菌尚无确定的药敏标准,淋病奈瑟球菌的药敏试验不是常规。报告“敏感”的意思是:如果抗菌药物的浓度达到通常可达到的浓度时可能抑制病原菌。报告“中敏”表示治疗结果不肯定,如果细菌对其他可用药物也不是完全敏感,则需要重复药敏试验。这一类结果的临床意义是:感染部位的药物浓度较高或可以加大用药剂量这两种情况下,可以用阿奇霉素治疗。该结果提供一个缓冲的范围,可以避免微小的未加控制的技术因素造成结果解释的显著差异。报告“耐药”表示:抗菌药物达到通常可达到的浓度时,病原菌不可能被抑制,应当选择其他治疗药物。[u]质量控制[/u]标准化的药敏试验方法要求用质控菌株,控制试验过程中的技术方面。使用阿奇霉素标准粉剂,各质控菌株的药敏结果范围见表2。质控菌株是有内在生物学特性的特定菌株。质控菌株非常稳定,可以得到标准的、可重复的药敏结果。用于微生物学质量控制的特定菌株没有临床意义。表 2. 阿奇霉素可接受的质控范围 毒理研究重复给药毒性小鼠、大鼠和犬多次给予阿奇霉素后,一些组织中可发生磷脂质病(细胞内磷脂聚集)。已证实按体表面积mg/m[sup]2[/sup] 计算,给犬服用大约相当于成人剂量的阿奇霉素,给大鼠服用相当于成人剂量1/6的阿奇霉素后,许多器官可发生这种改变,如眼、神经节背根、肝、胆囊、肾脏、脾脏和胰腺。停用阿奇霉素后,这种改变可以恢复。新生大鼠和犬每日一次给予阿奇霉素,10~30天后,组织中也发生磷脂质病,并且程度相同。根据药代动力学数据,大鼠给予30mg/kg阿奇霉素后,发生磷脂质病时,观察到Cmax值为1.3μg/ml(这一数值是儿童用药量10mg/kg时Cmax 值0.216μg/ml的6倍)。同样,犬给予10mg/kg阿奇霉素后,发生磷脂质病时其Cmax值为1.5μg/ml(这一数值是所研究的儿童人群中Cmax值和给药剂量的7倍)。按体表面积mg/m[sup]2[/sup]计算,新生大鼠30mg/kg的剂量(135mg/m[sup]2[/sup])和犬10 mg/kg的剂量(79 mg/m[sup]2[/sup])约分别为平均体重25kg的儿童患者推荐剂量的0.45倍和0.3倍。停用阿奇霉素后这种作用呈可逆性,与成年动物所观察到的情况相似。这些发现对动物和人类有何意义尚不明确。遗传毒性在小鼠淋巴瘤试验、人淋巴细胞试验和小鼠骨髓微核试验等标准实验室检查中未发现阿奇霉素有潜在致突变作用。生殖毒性大鼠和小鼠的生殖毒性试验均显示,当阿奇霉素给药剂量达产生中等程度的母体毒性的剂量水平(即200mg/kg/日,按体表面积计算,约为人用药剂量500mg/kg/日的2~4倍)时,未发现致畸作用。未发现对生育力和胎仔的损害。致癌性目前尚未进行长期动物试验以平价阿奇霉素是否具有潜在致癌性。
这里瞎说的人还真不少
R代表耐药,I代表中度敏感,S代表敏感。通常,标有R的药物往往不会有效,标有S的会比较有效,当然,有时体内情况与体外的实验有一点区别。
尿急估计和这个感染有关,按照药敏结果吃一段时间的药,应该会有改善
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